用HP20大孔吸附树脂提取Mevastatin的研究

周鹃　印培民

摘要：报道了用HP20大孔吸附树脂从发酵液中提取Mevastatin的研究结果。HP20大孔吸附树脂每mL湿树脂对Mevastatin的吸附能力为83.8 mg 。用本方法制取的Mevastatin 纯度达95%(HPLC)，完全符合用于Pravastatin的生产。
关键词：HP20大孔吸附树脂；Mevastatin；吸附
中图分类号：TQ460.6⁺4；R972⁺.6；TQ424.3　　　文献标识码：A1　材料和方法

1.1　吸附树脂

ZHOU Juan¹， YIN Pei-min²
(1.Jiangxi Institute for Drug Control， Nanchang 330046， PRC;
2.Institute of Microbiology,Jiangxi Academy of Sciences， Nanchang 330029,PRC)

　　Abstract：This paper described the method of recovery of Mevastatin from fermentation liquid by macroreticula adsorbent HP20.The adsorption ability of HP20 is 83.8 mg Mevastatin/ml resin.The purity of Mevastatin produced by this method is detected as 95% with HPLC.This technic is highly suitable for using as the raw material for Pravastatin production.
　　Key words：Macroreticula adsorbent HP20；Mevastatin；Adsorption

　　羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-GoA)抑制剂Pravastatin Na是**由高血脂引起的心血管**的*新一代**药。Pravastatin Na的生产方法为微生物二步发酵法。先由青霉(Penicillium citrinum)从糖发酵生产Mevastatin(又名Compactin,ML-236B)。经提取精制得到的Mevastatin在NaOH作用下转化为Mevastatin Na,再由Streptomyces carbophilus等具有羟基化酶活性的微生物发酵转化为Pravastatin Na^［1，2］。
　　关于从发酵液中提取精制Mevastatin的方法，有报道：有机溶媒萃取结合各种层析技术^［3，4］，但未见其它论文公开报道。我们通过实验选出了HP20大孔吸附树脂，它具有非常优良的对Mevastatin的吸附性能，所构建的提取精制工艺简单、高效，**工业应用价值。


　　HP20(Diaion)，使用前按常规处理。
1.2　Mevastatin发酵液
　　由Penicillium citrinum thom 38065发酵而得，Mevastatin的质量浓度在400 mg^．L^-1左右。
1.3　Mevastatin标准品
　　由日本静冈大学生物工学研究室提供。纯度为99%(HPLC)。
1.4　试剂
　　各种试剂均为化学纯或HPLC级。
1.5　Mevastatin的分析方法
　　Mevastatin的浓度用高压液相色谱法测定(岛津LC-10AD型)。
　　流动相：甲醇77%、水22.8%、醋酸0.1%、三乙胺0.1%。
　　流　速：1.0 mL^．min^-1。
　　分析柱：STR ODS-II，4.6 mm×150 mm(日本信和化工株式会社)。
　　测定波长(λ)：237 nm。
　　测定温度：25 ℃。
　　测定时间：10 min (Mevastatin的保留时间为(6.5±0.2) min)。
1.6　采用动态吸附法^［5］
　　样品被吸附后，树脂用无盐水洗涤，φ=0%～100%丙酮梯度解吸。


　　Mevastatin溶液在HP20树脂上的吸附曲线如图1 (Fig.1)所示。V_吸附(滤液量)∶V(HP20树脂)在150∶1以内时，吸附效果*好，无Mevastatin泄漏。当该体积比大于150∶1时，Mevastatin的泄漏急剧上升。至170∶1时，树脂吸附基本完成，此后吸附量缓慢上升，至220∶1时，达吸附平衡状态。该吸附曲线表明，HP20树脂对Mevastatin有很强的吸附力，每1 mL湿树脂对Mevastatin的吸附量为83.8 mg。Mevastatin发酵液在HP20树脂上的吸附行为亦如图所示，但总吸附量由于发酵液中各种杂质的影响而有所下降。此后用无盐水洗涤吸附树脂，以除去各种无机离子、部分色素等杂质。2　结果和讨论

2.1　Mevastatin在HP20脂树上的吸附和解吸

　　Mevastatin在HP20树脂上的解吸曲线如图2(Fig.2)所示。采用φ=0%～100%丙酮梯度洗脱。当丙酮在φ=0%～20%时，大量吸附在树脂上的色素被洗脱而无Mevastatin被洗脱。进一步将丙酮从φ=20%升至φ=100%时，被吸附在树脂上的Mevastatin在φ=(30%～60%)的丙酮中被集中洗脱下来。所收集的含Mevastatin的洗脱液为淡黄色，浓缩比达15倍以上。充分体现了梯度洗脱液体积小，时间短的特点。之后树脂在高体积分数的丙酮下完成清洗，用水再生后即可重新使用。

2.2　实验室提取实验
　　用HP20树脂从发酵液中提取精制Mevastatin的工艺如下：发酵液经过滤得滤液，滤液用2 mol^．L^-1 HCl调pH至7.0，进HP20树脂柱吸附。当进样量达到树脂的工作吸附容量，即检有Mevastatin漏出时，停止进样。继而用无盐水洗涤HP20树脂后，用φ=(0%～100%)丙酮梯度洗脱，收集含Mevastatin的解析液。用w=0.05%活性炭脱色后，蒸去丙酮，浓缩冻干得Mevastatin粗品。粗品用少量φ=35%的丙酮复溶后，加入3～5倍pH 2.0的蒸镏水结晶得Mevastatin。各步收率和纯度见表1(Tablel)。